柱式质粒小量抽提试剂盒(1.5～5mL)

产品货号：

GS2249

中文名称：

柱式质粒小量抽提试剂盒(1.5～5mL)

英文名称：

SD-10 Column Plasmid Mini-Preps Kit(1.5-5mL)

产品规格：

50T|100T

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本试剂盒用于质粒DNA小量抽提纯化，方法简单高效。质粒DNA被选择性地吸附到SD-10吸附柱的硅胶膜上，其他杂质如蛋白、盐离子、核苷酸、寡核苷酸(<40-mer)等会被洗涤掉。质粒DNA从吸附柱上洗脱下来后可用于任何后续实验。

快速。整个过程只需要15～20分钟。
从菌液中制备出高质量的质粒DNA。纯化的DNA可用于测序、PCR、酶切、转化和连接等任何后续分子生物学实验。
回收率高(＞80%)。
无需苯酚/氯仿抽提或乙醇沉淀。

组分	50T	100T
RNase A	210μL	420μL
Solution I	14mL	28mL
Solution II	14mL	28mL
Solution III	20mL	40mL
Wash Solution	12mL	24mL
Elution Buffer	5mL	10mL
SD-10吸附柱(2mL收集管)	50套	100套

保存：室温，有效期1年，其中RNase A应保存于4℃。

注意事项

使用前，将RNase A溶液全部加入到Solution I中并混合均匀。含RNase A的Solution I如经常使用应保存于4℃，不经常使用则保存于-20℃。
Solution II保存过程可能会形成沉淀。如有沉淀，则将溶液于37℃温浴使沉淀溶解。
使用前，12mL Wash Solution (50次)中应加入48mL 96～100%的乙醇，或24mL Wash Solution(100次)中应加入96mL 96～100%的乙醇。如果是其他体积的Wash solution，只需要加入足够的乙醇使得比例为4:1 (无水乙醇:Wash Solution = 4:1)。
Elution Buffer为2.0mM Tris-HCl，pH8.0～8.5。回收率相当于TE buffer pH8.0或水的120%。

一、质粒DNA纯化步骤

加入1.5mL过夜培养的细菌到1.5mL离心管中，12000rpm离心1min。吸净上清。对于低拷贝的质粒，参见下文的操作步骤。
- 5mL离心管中不要加入过多菌体，否则会裂解不完全。
向菌体沉淀加入250μL Solution I，温和混匀，静置2min。
- 请彻底悬浮菌体，否则会裂解不完全。
向上述混合液中加入250μL Solution II，温和颠倒离心管4～6次，室温静置1min。
- 为避免基因组DNA污染，请勿剧烈涡旋振荡。裂解时间不可超过5min。
加入350μL Solution III，温和混匀。室温静置5min。
12000rpm离心10min。
将上清(步骤5)转移到SD-10吸附柱。8000rpm离心2min。
倒掉收集管中的液体。加入500μL Wash Solution到吸附柱中，10000rpm离心1min。
重复洗脱步骤7一次。
倒掉收集管中的液体。10000rpm离心2min以除去残留的Wash Solution。
- 为能够更好地洗脱质粒DNA，请将SD-10吸附柱室温静置10min或50℃烘箱烘干5min，以使残留的乙醇彻底挥发。
将吸附柱放入一个干净的1.5mL离心管中。在吸附膜中央加入50μL Elution Buffer，室温静置2min。10000rpm离心2min。
- 为能够更好地洗脱质粒DNA，可将Elution Buffer或ddH2O加热至60℃，再加入到SD-10吸附柱中。
将纯化的DNA保存于-20℃。
- 在吸附膜中央加入Elution Buffer非常重要。含有Elution Buffer的吸附柱在较高的温度(37～50℃)下孵育可少量提高回收率，特别是对于大的(＞10kb)质粒DNA效果更明显。将Elution Buffer在55℃至80℃预热也可少量提高洗脱效率。

二、低拷贝质粒DNA纯化步骤
质粒DNA纯化步骤的注意事项如前所述。

取3～5mL过夜培养的菌液。加入1.5mL菌液到1.5mL离心管中，12000rpm离心1min。吸净上清，其余部分菌液也同样操作以富集菌体(加入到同一个离心管中)。
向菌体沉淀加入500μL Solution I，温和混匀，室温静置2min。
向上述混合液中加入500μL Solution II，温和颠倒离心管4～6次，室温静置1min。为避免基因组DNA污染，请勿涡旋振荡。
加入700μL Solution III，温和混匀。室温静置2min。
12000rpm离心5min。
取一半的上清(步骤5)转移到SD-10吸附柱，静置2min。8000rpm离心1min。倒掉收集管中的液体，加入另一半的上清，8000rpm再次离心1min。
倒掉收集管中的液体。加入500μL Wash Solution到吸附柱中，8000rpm离心1min。
重复洗脱步骤7。
倒掉收集管中的液体。10000rpm离心2min以除去残余的Wash Solution。
将吸附柱放入一个干净的1.5mL离心管中。在吸附膜中央加入50μL Elution Buffer，室温静置2min。10000rpm离心2min。
将纯化的DNA保存于-20℃。
- 在吸附膜中央加入Elution Buffer非常重要。为得到更高浓度的DNA，可以洗脱两次，每次加入25μL Elution Buffer，而不是每次加入50μL。含有Elution Buffer的吸附柱在较高的温度(37～50℃)下孵育可少量提高回收率，特别是对于大的(＞10kb)质粒DNA效果更明显。将Elution Buffer在55～80℃预热也可少量提高洗脱效率。

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